Методи за изолација на полирибозоми. Димензии полирибозоми синтетизираат антитела

Во моментов, за да се потенцира полирибозоми од лимфоидни тумори ткиво и миелом обично користат нивната хомогенизација во Tris пуфер раствори (pH 7,0-7,6) кој содржи сахароза, KCl (или помалку - NaCl), MgCl2 (или магнезиум ацетат) и било кој од RNase инхибитор (почесто - хепарин). Предуслов е употребата на реагенси не содржи RNase. Прво отстрани од јадрото на хомогенат и митохондрии postmitochondrial супернатантот беше додаден на било кој од детергент (натриум deoxycholate или Тритон X-100) беше растворени enodoplazmaticheskogo ретикулум мембрана и предизвикана polirobosomy (или фракционирана) во чекор (0,5-1,5 М) или линеарна (обично 15-30% раствор) сахароза стрмнини. Принос poliribosomnogo материјал е во овој случај 30-50% од сите мобилни рибозоми.

Степенот на Христовото раѓање полирибозоми, добиени од различни извори влијаат на концентрацијата на сахароза, што јонската сила и pH вредноста на односот на пуфер раствор се користи K / Mg и природата на детергент. Така, за полирибозоми од слезината подобро да се користи Тритон X-100, како и во присуство на натриум deoxycholate познат по нивната деградација. Во некои случаи, тоа, исто така, се препорачува додавање на мали количества SaS12 или спермидин подобрување на стабилноста на мобилен јадра (Goryunova et al., 1974- ѕид д. A., 1977), и 2-меркаптоетанол (Шехтер, 1973). Со цел да се намали времето за контакт на полирибозоми од клеточен лизат исто така, може да се примени директно клетки кои содржат детергент инхибитор на ламинат директно на сахароза градиент. Во овој случај, при центрифугирање kletkp истовремено лизираат и фракционирана (Дејвис д. A., 1969).

Треба да се напомене дека изолацијата на мајчин јазик полирибозоми клетки од лимфоидни ткива на нормален или вакцинирани животинско ткиво е многу покомплексна и помалку развиените процедура од нивното одвојување од plasmacytomas. Можеби ова се должи на фактот дека постои плазмоцитом ендогени RNase инхибитор, додека во јазли, слезината и лимфата, тоа не е, и RNase активност во имунизација дури и се зголемува.

значителен улога, очигледно игра еден вид на животно. Најповолниот објекти, ред податоци слезината и лимфните јазли од стаорец, од каде што е можно да се добие мајчин полирибозоми, sedimenting на 250-350S и 160-190S опфаќа активна пулсот и ознака амино киселина (Vassalli, 1967- Васил et al., 1969). Исто така, постојат извештаи за распределба на мајчин јазик полирибозоми од слезината на зајаци (Becker, Рич, 1966- Scharff, Uhr, 1965) и заморчиња (Николаева, 1976). Бидејќи тумор ткива најбогат извор на полирибозоми се mielomy- лимфоми во помал број од овие органели (Sherr, Uhr, 1971a).

Како резултат на тоа, подобрувања фракционирање техника лимфоидни ткива на животни клетки и глушец plasmacytomas успеаја да ги изолираат широк спектар на полирибозоми со таложење константи од 118S да 350S. Покажано е дека вакцинацијата износ полирибозоми и пол до два пати се зголемува (Moav, Харис, 1970- YUrin, 1971), и нивните специфични дистрибуција станува двофазен природата. Слични податоци на миелом клетки се добиени од Шуберт (Шуберт, 1968) и контакт (Сидоров et al., 1973).

Се смета дека двофазен дистрибуција полирибозоми, означени од страна на растечката полипептидни синџири одразуваат присуството на две класи на полирибозоми кои се вклучени во синтезата на H- и L-синџири. Имунопреципитација експерименти со полирибозоми антисеруми да H- и L-синџири беше навистина покажува дека H-синџирот откриени само на полирибозоми 270-300S, и L-синџир - по можност на полирибозоми 180-190S (Шапиро ЕА, 1966a- Askonas, Вилијамсон, 1967b ). Според пресметките врши од страна на авторите, како полирибозоми треба да содржи mRNA, која се состои од околу 1250 и 500 нуклеотиди, односно. E. сосема соодветни за кодирање на синтеза на H- и L-синџири.

добиени податоците две фундаментално важни заклучоци, имено: 1) синтеза на имуноглобулини е monotsistronnyi природата и 2) големината на полирибозоми и mRNA се вклучени во формирањето на H- и L-синџири, се доволни за да се кодираат синтеза на секој од нив како целина.