Лабораториски методи на истражување. протеинурија

Видео: лабораториски студии: Хематологија

Cодржина

Видео: лабораториски студии: Хематологија

Ренална (вистинска) протеинурија
Екстраренален (лажни) протеинурија

Одредување на протеини во урината

Одредување на дневниот протеинурија
K = (x·-v) / 1000

селективна протеинурија
&бета-2-микроглобулин
Просечна крв и урина молекули
Neplazmennye (ткиво), uroproteiny
Студијата на ензими во крвта и урината
Bence-Џонс протеин

Мали количини на протеини се наоѓаат во дневната урина од здрави лица. Меѓутоа, такви ниски концентрации не може да се открие од страна на конвенционалните методи на истражување. Изолација на поголеми количини на протеини за кои конвенционалните квалитативни тестови за протеини во урината стане позитивен, се нарекува протеинурија. Разграничување на бубрезите (вистинска) и екстраренален (лажни) протеинурија. Во бубрежна протеинурија протеини во урината навлегува директно од крв се должи на зголемување на неговата филтрирање или намалување на бубрезите гломерулите тубуларна реапсорпција.

Ренална (вистинска) протеинурија

Ренална (вистинска) протеинурија е функционална и органски. најчесто се забележани по својот род меѓу функционална бубрежна протеинурија:

- физиолошки протеинурија бебиња што исчезнува од 4 до 10 дена по раѓањето, и предвремено подоцна;
- ортостатска албуминурија, што е типично за деца на возраст од 7-18 години и се појавува само во вертикална положба на телото;
- минливи (мозочен удар) албуминурија, што може да биде причина за разни болести на органите за варење, тешка анемија, изгореници, повреди или физиолошки фактори тешки вежби, хипотермија, силни емоции, изобилство, богата со протеини храна и други.

Органско (бубрежна) протеинурија е забележано се должи на премин на протеин од крвотокот низ оштетени делови ендотелијалните гломеруларна бубрежни болести на (гломерулонефритис, нефроза, нефросклероза, амилоидоза, нефропатија бремена), нарушувања на бубрежната хемодинамиката (бубрежна венска хипертензија, хипоксија), трофични и токсични (вклучувајќи вклучително и лекови) ефекти на гломеруларна капиларните ѕидови.

Екстраренален (лажни) протеинурија

Екстраренален (лажни) протеинурија во кои извор на протеини во урината е смеса на леукоцити, еритроцити, бактерии, уротелијален клетки. забележани за време на уролошки заболувања (уролитијаза, бубрежна туберкулоза, бубрезите и тумор на уринарниот тракт, итн).

Одредување на протеини во урината

Повеќето од квалитативни и квантитативни методи за определување на протеини во урината врз основа на неговата коагулација во волуменот на урината или во интерфејс (и кисела урина).

Дополнителни квалитативни методи за утврдување во урината bedka најшироко стандардизиран тест со примена на сулфосалицилна киселина и прстенест примерок Гелер.

Стандардизиран тест со sulfasalitsilovoy киселина се врши на следниов начин. На две цевки се истури на 3 ml на филтрирани урината. Еден од нив е додаден 6-8 капки раствор на 20% sulfasalitsilovoy киселина. На темна позадина се споредуваат двете цевки. Заматување урина во цевка со sulfasalitsilovoy киселина укажува на присуство на протеини. Пред почетокот на студијата е потребно за да се утврди реакцијата на урина, и ако тоа е алкална, а потоа закиселена со 2-3 капки на 10% раствор на оцетна киселина.

Гелер примерок врз основа на фактот дека присуството на протеини во урината на интерфејсот на азотна киселина и урина коагулација се случува и што се појавува бел прстен. Во цевката со тест се истура 2.1 ml на 30% раствор на азотна киселина и нежно слоевит на ѕидот на цевката е точно истиот износ на филтрирани урината. Појавата на бел прстен на границата на две течности укажува на присуство на протеини во урината. Треба да се запомни дека понекогаш бел прстен е формирана со голем број на урати, но за разлика од протеини се чини прстен малку над границата меѓу двете течности и растворени под греење [Плетњов НГ 1987].

На квантитативни методи најчесто се користат:

1) единствен метод Brandberg-Робертс-Stolnikova, градење на прстенестото примерок Гелер;
2) fotoelektrokolorimetrichesky метод на квантитативно определување на протеини во урината на замагленост формира врз основа на прилог sulfasalitsilovoy киселина;
3) тест биурет.

Протеини Идентификација во урината поедноставен забрзан метод се врши од страна на Колориметриски метод со користење на индикаторска хартија, кој е произведен од страна на «Lachema» (Словачка), «Albuphan», «Ames» (Англија), «Albustix», «Boehringer» (Германија), «Comburtest» и други. методот се потопува во урината посебна хартија лента импрегнирани tetrabromfenolovym сина и цитрат, која ја менува бојата од жолта сина боја, во зависност од содржината на протеини во урината. Концентрацијата на приближна на протеини во урина за тестирање на е утврдено од страна стандардна скала. За да се добијат точни резултати, мора да бидат исполнети следниве услови. pH на урината треба да биде во 3,0-3,5- на премногу алкална урина (pH 6,5) ќе се добие лажно позитивен резултат, и кога премногу кисела урина (pH 3,0) - лажно негативни.

Трудот треба да биде во контакт со не подолго од што е наведено во упатствата за истрага на урина, во спротивно тестот ќе даде лажно позитивна реакција. Вториот е исто така забележани кога содржината во урината на големи количини на слуз. Чувствителноста на различни видови на хартија и серии можат да бидат различни, па квантитативна процена на протеини во урината со овој метод треба да се третираат со претпазливост. Определување на нејзината висина во дневниот урина со користење на хартија тест не може да [Плетњов НГ 1987]

Одредување на дневниот протеинурија

Постојат неколку начини за да се утврди нивото на протеини во урината ослободен дневно. Наједноставниот метод е Brandberg -Robertsa-Stolnikova.

Методологија. 5-10 ml од целосно предизвика дневно урината се става во цевката и на ѕидовите на својата внимателно додаде 30% раствор на азотна киселина. Во присуство на протеини во урината во износ од 0,033% (на пример 33 mg на 1 литар урина) за 2-3 минути се појавува суптилни, но јасно видлива бел прстен. На негативен примерок пониска концентрација. На повисока содржина на протеини во урината се определува со количината на урина повтори раствори со дестилирана вода се додека се додека не формираат прстен. На последниот цевка, во кои прстенот е уште се видливи, концентрација на протеин ќе биде 0.033%. 0.033 множење на степен на разредување урина, содржина на протеини е утврдена во 1 л на неразреден урината во грама. Потоа се пресметува содржината на протеини во урината дневниот според формулата:

K = (x·-V) / 1000

каде што K - количина на протеини во дневните урина (g) - x - количина на протеини во 1 литар на урина (g) - V - количината на урина дневно распределени (ml).

Нормално, во текот на денот урината е ослободен од 27-ми до 150 mg (во просек 40-80 mg) на протеини.

Оваа анализа овозможува да се одреди само парична казна урина протеини (албумин). Повеќе точни квантитативни методи (Колориметриски метод Kjeldahl et al.) Се прилично комплицирана и бара специјална опрема.

Во бубрежна протеини во урината албумин издвоите, не само, но исто така и други видови на протеини. Нормално proteinogramma има следниве процент (Со Seitz, et al, 1953).: Албумини - 20%, &алфа-₁-глобулин - 12% &алфа-₂-глобулин - 17% &гама - глобулин - 43% &бета - глобулин - 8%. На односот на албумини да глобулин варира под различни болести на бубрезите, т.е. нарушена квантитативно соодносот помеѓу протеински фракции.

Најчестите методи uroproteinov фракционирање се како што следува: солење неутрални соли, Електрофоретскиот фракционирање, имунолошки методи (а реакцијата според Манчини радијална имунодифузија, анализа имуноелектрофореза, pretsipitatsionny имуноелектрофореза), хроматографија, гел филтрација и ултрацентрифугирање.

методи фракционирање воведувањето uroproteinov врз основа на проучувањето на електрофореза мобилност, променливоста на молекуларна тежина, големина и облик uroproteinov молекули, можно е да се одвои специфични за одделни студиски видови болести протеинурија сертификати се на плазма протеините. Во моментов се идентификувани во урината на повеќе од 40 плазматските протеини, вклучително и во нормална урина плазма протеините 31 [Berggard, 1970].

селективна протеинурија

Во последниве години, концептот на селективноста на протеинурија. Во 1955 година, Hardwicke и племеник имаат формулирано концептот на "селективна" и "не-селективна" протеинурија, утврдување дека на филтрација на плазма протеини во урината е предмет на одреден шемата на: толку поголема молекуларна тежина на протеин излачува во урината, а помалку тло и долниот концентрација во конечната урина. Протеинурија одговара на овој модел е селективен, за разлика од не-селективен, која е карактеристична за нарушување модели изведени.

Откривање на протеини во урината, со релативно висока молекуларна тежина покажува недостаток на селективност бубрежна филтер и ја изрази својата пораз. Во овие случаи се зборува за ниски селективноста на протеинурија. Затоа, во присутни распространета утврдување протеински фракции урина со користење на техники електрофореза со скроб и полиакриламид гел електрофореза. Резултатите од овие истражувања методи може да се процени на селективноста на протеинурија.

Според V.S.Mahlinoy (1975), повеќето оправдано е да се утврди селективноста на протеинурија со споредување на сертификати 6-7 поединечни крвна плазма протеини (албумин, traneferrina, &алфа-₂ - макроглобулин, IgA, IgG, IgM) со користење на прецизни и специфична реакција квантитативно имунолошки радијални имунодифузија според Манчини, и анализа имуноелектрофореза pretsipitalnogo имуноелектрофореза. На степен на селективност се определува со индекс протеинурија селективност, што претставува односот на референца и во споредба протеини (албумин).

Проучување клиренс на плазма протеините овозможува да се добие релевантни информации за состојбата на филтрација базалните мембрани на бубрезите гломерулите. Врската меѓу природата на протеини се излачува во урината и промени во гломеруларната мембрана и се изразува како постојана, дека uroproteinogramme индиректно може да им суди на патофизиолошки промени во бубрежната гломерулите. Нормално, просечната големина на порите на гломеруларната мембрана е 2,9-4 ° NM А, кој може да го прескокнете протеини кои ги имаат молекуларна тежина до 10⁴ (Mioglobulin, кисело &алфа-₁ - гликопротеин, имуноглобулин лесни ланци, Fc и Fab - фрагменти од IgG, албумин и трансферин).

Гломерулонефритис, нефротски синдром пора големини зголемување на гломеруларната мембрана, а со тоа и на базалната мембрана станува пропустлив за протеински молекули со големи димензии и маса (церулоплазмин, хаптоглобин, IgG, IgA и др.). Во екстремни бубрежна гломеруларна штета во урината се појавуваат гигант молекули крвна плазма протеини (&алфа-₂-макроглобулин, IgM и &бета-₂-липопротеин).

Дефинирање на спектарот на протеини во урината, може да заклучиме дека примарната лезија на одредени делови на нефронот. За гломерулонефритис, главно влијае на гломеруларната мембрана се карактеризира со присуство во урината на средни и протеини. За пиелонефритис, главно влијаат на базална мембрана на тубули карактеристика krupnomolekulyarnyh отсуство и присуство на зголемени количини на среден и низок протеини молекуларна тежина.

&бета-₂-микроглобулин

Во прилог на познати протеини, како што се албумин, имуноглобулини, липопротеини. фибриноген, трансферин, урина содржи плазматските протеини mikroproteiny, вклучувајќи ги и клинички интерес &бета-₂-микроглобулински отворен Berggard и Bearn во 1968 година ја со ниска молекуларна тежина (релативна молекуларна маса од 1800), тоа поминува слободно преку бубрезите гломерулите и скоро целосно се реапсорбира во проксималните тубули. Ова им овозможува користење на квантитативна дефиниција &бета-₂-микроглобулински во крвта или урината за да се утврди стапката на гломеруларна филтрација и бубрежна капацитет ресорпција за протеини во проксималните тубули.

Концентрацијата на протеини во плазмата и урината е утврдено од страна радиоимуноесеј со користење на стандарден сет на «Phade-bas &бета-₂-mikroiest »(компанија" Pharmasia ", Шведска). Во здрави индивидуи серумот содржи во просек 1,7 mg / L (во опсег од 0,6 до 3 mg / l) во урината - просечна 81 mg / l (максимум 250 mg / l) &бета-₂-микроглобулин. Вишокот на урината во над неговата 1000 .mu.g / l - патолошки феномен. содржина &бета-₂-микроглобулински во крвта се зголемува во болести поврзани со оштетен стапка на гломеруларна филтрација, особено во акутен и хроничен гломерулонефритис, полицистични бубрези, нефросклероза, дијабетска нефропатија, акутна ренална инсуфициенција.

концентрација &бета-₂-микроглобулин во урината се зголемува кај болести поврзани со нарушена функција reabsorbtsionnoy тубули, што доведува до зголемување на неговата екскреција во урината во 10-50 пати, особено во пиелонефритис, хронична ренална инсуфициенција, гноен интоксикација et al. Карактеристично, циститис разлика не пиелонефритис набљудуваните зголемување на концентрацијата &бета-₂-микроглобулин во урината, која може да се користи за диференцијална дијагноза на овие болести. Сепак, при толкување на резултатите од студијата треба да се смета дека секое зголемување на температурата е секогаш придружено со зголемување на излачувањето &бета-₂-микроглобулин во урината.

Просечна крв и урина молекули

Просечна молекула (SM), инаку наречен протеин токсини се супстанции со молекуларна тежина од 500-5000 далтони. Нивната физичка структура е непознат. Структурата на CM се состои од најмалку 30 пептиди: окситоцин, вазопресин, инхибитори на ангиотензин, глукагон, адренокортикотропен хормон (ACTH), итн прекумерна акумулација на CM е забележано со намалување на функцијата на бубрезите и содржината во крвта на голем број на деформира протеини и нивните метаболити .. Тие имаат различни биолошката активност и невротоксичност секундарна причина имуносупресија, секундарна анемија, го инхибираат биосинтезата на еритропоезата протеини и ја спречуваат активноста на многу ензими кои го нарушуваат фазата на воспаление.

ниво СМ во тест на крвта и скрининг на урина е решена, а исто така и со спектрофотометрија во областа на ултравиолетови бранова должина од 254 и 280 mm спектрофотометар Ки-8B и динамична спектрофотометрија со компјутерска обработка во опсегот 220-335 nm бранова должина во истата компанија Beckman спектрометар . За време на нормално добиваат CM крвта содржина е иста со 0,24 ± 0,02 УСЛ. единици, а во урината -. 0312 ± 0,09 разговор. u
Како нормален живот производ на организмот, тие се отстранети од нормалниот ноќен живот по пат на гломеруларна филтрација за 0,5% - 5% од користени од страна на друга. Сите фракции СМ изложени тубуларна реапсорпција.

Neplazmennye (ткиво), uroproteiny

Покрај плазма протеините во крвта, урината може да се neplazmennye (ткиво) протеини. Според Buxbaum и Френклин (1970), neplazmennye протеини сочинуваат околу 2/3 од сите урина и biocolloids uroproteinov значаен дел на патолошки протеинурија. Ткиво протеини падне директно во урината од бубрезите или органи се анатомски поврзани со инфекции на уринарниот тракт, или пад од други органи и ткива во крв, и од таму преку бубрезите на базална мембрана - во урината. Во вториот случај, излачувањето на протеини во урината отстранување ткиво се јавува, аналогно на плазма протеините на различни молекуларни тежини. Состав neplazmennyh uroproteinov екстремно различни. Меѓу нив, гликопротеини, хормони, антигени, ензими (ензими).

Ткиво протеини откриени во урината со користење на конвенционални методи на протеини хемија (ултрацентрифугирање, хроматографија гел електрофореза, различни embodiments), специфични одговори на хормони и ензими и имунолошки методи. Второто овозможува, исто така, за да се утврди концентрација neplazmennogo uroproteina во урината и во некои случаи да се идентификуваат ткиво структури, кои станаа извор на својот изглед. Основниот метод за откривање на протеини во урината е neplazmennogo анализа имунодифузија со антисеруми добиени со имунизација на експериментални животни и човечки урина исушена (адсорбиран) во последователен плазма протеините.

Студијата на ензими во крвта и урината

Кога процесот на болеста забележани длабоко штета виталните клетки, во придружба на ослободување на интрацелуларен ензими во течност средина на телото. Enzimodiagnostika е врз основа на дефиницијата на голем број на ензими изолирани од клетки на оштетените органи и не се карактеристични за серумот.
Истражување нефронот луѓето и животните покажаа дека некои од неговите дела имаат високо ниво на ензимот диференцијација, тесно поврзани со функциите што се извршуваат од страна на секој оддел. Во бубрезите гломерулите содржи релативно мал број на различни ензими.

Бубрежните тубули клетки, особено проксимално содржи максималниот број на ензими. Нивната висока активност е забележана во јамка на петелка, директно тубули и собирните канали. Промени во активноста на одредени ензими во разни болести на бубрезите, зависи од процесот на природата, сериозноста и локализација. Тие се забележани пред морфолошки промени во бубрезите. Од содржината на различни ензими јасно локализиран во нефронот, дефиницијата на одреден ензим во урината може да придонесе за актуелни дијагностицирање на патолошки процес во бубрезите (гломерулите, тубули, кортексот и медулата), диференцијалната дијагноза на бубрежни заболувања и за утврдување на динамиката (амортизацијата и егзацербација) процес во бубрежната паренхим.

Должина за диференцијална дијагноза на заболувања на урогениталниот систем се користи за да се утврди активност во крвта и урината од следниве ензими: лактат дехидрогеназа (LDH), леуцин аминопептидаза (ЛАП), киселина фосфатаза (АП), алкална фосфатаза (ALP), &бета -. глукуронидаза, глутаминска-oxaloacetic трансаминазите (GSCHT), алдолаза transamidinase итн ензимска активност во серум и урина е утврдено од страна биохемиски, Спектрофотометриски, хроматографија, fluorimetric и хемилуминисцентен методи.

Enzimuriya во бубрежна болест е повеќе нагласена и природни, од enzimemiya. Тоа е особено силно изразена во акутна фаза на болеста (акутен пиелонефритис, траума, тумор на забите, инфаркт на бубрезите, итн). Во овие болести откриени transamidinase висока активност, LDH, алкална фосфатаза и KF, хијалуронидаза, LAP и не-специфични ензими, како што GSCHT, каталаза [Polyantseva LR 1972].

Селективен локализација на ензими во нефронот по откривање на круг и алкална фосфатаза во урината може да самоуверено велат на акутни и хронични бубрежни заболувања (акутна бубрежна инсуфициенција, ренална тубуларна некроза, хроничен гломерулонефритис) [Shemetov VD 1968]. Според A.A.Karelina и L.R.Polyantsevoy (1965) transamidinase содржи само две тела - бубрезите и панкреасот. Тоа е митохондријална ензим и бубрезите во нормалната крв и урина отсутни. Во различни болести на бубрезите transamidinase се појавува во крвта и урината, а во панкреасот лезии - само во крвта.

Диференцијална тест во дијагноза на гломерулонефритис и пиелонефритис Krotkiewski (1963) смета на активноста на алкална фосфатаза во урината, што претставува зголемување која е потипично за пиелонефритис и дијабетска гломерулосклероза отколку за акутни и хронични нефритис. Зголемување на динамиката amilazemiya додека намалување amylasuria може да се укаже нефросклероза и бубрежна лузни, ЛАП има најголема вредност во патолошки промени во гломерулите и згрчена тубули на бубрезите, бидејќи неговата концентрација во овие региони на нефронот повисока [Shepotinovsky VP et al., 1980]. Препорачани дефиниција за дијагностицирање на лупус нефритис &бета - глукуронидаза и CF [Privalenko MN et al., 1974].

При оценувањето на enzimurii улога во дијагностицирање на болести на бубрезите, треба да се земат предвид следниве одредби. Ензими, се инхерентно протеини со мала молекуларна тежина може да помине низ непроменети гломерулите, дефинирање на т.н. физиолошки enzimuriyu. Меѓу овие ензими постојано се утврдува во урината &алфа - амилаза (релативна молекуларна маса 45 Ltd) и uropepsin (релативна молекуларна тежина 38.000).

Заедно со ензими ниска молекуларна тежина во урината на здравите луѓе може да се најде во мали концентрации и други ензими: лактат дехидрогеназа, аспартат и аланин аминотрансфераза, алкална фосфатаза и KF, малтаза, алдолаза, липаза, протеаза и разни пептидаза, сулфатаза, каталаза, ribonuclease, пероксидаза [Кинг, Boyce 1963].

Висока молекуларна ензими со релативна молекулска маса од повеќе од 70000-100000, според Richterich (1958) и Хес (1962), можат да навлезат во урината само во кршење на гломеруларна филтер пропустливост. Нормална содржина ензим во урината не ја исклучува патолошки процес во бубрегот со уретрална оклузија. Кога epzimurii можно излез ензими не само од самите бубрезите, но исто така и од други паренхимални органи, мукозните мембрани на клетките на уринарниот тракт, простатата и урина формирани елементи со хематурија или leukocyturia.

Повеќето ензими кои не се конкретно во однос на бубрезите, па затоа, од каде ензими пронајдени здрави и болни во урината, е тешко да се утврди. Сепак, степенот enzimurii дури и должината на не-специфични ензими при болести на бубрезите е повисоко од нормалното или она што е забележано во болести на другите органи. За повеќе вредни информации може да се обезбеди сеопфатна студија на динамиката на голем број на ензими, особено орган-специфични, како што трансаминази.

Во решавањето на прашањето на бубрежно потекло на ензимот во урината помага да учат изоензими во идентификување на фракции типични за студирал орган. Изоензимите - тоа ензими од дејството на isogenic (катализира иста реакција), но хетерогени во хемиска структура и други својства. Секој материјал има карактеристичен за неа изоензимска спектар. Вредни Изоензимите сепарација техники се електрофореза со скроб и полиакриламид гел електрофореза и јонска размена хроматографија.

Bence-Џонс протеин

Во мултипли миелом и макроглобулинемија на Waldenstrom во урината откриени протеин Bence Џонс. Метод на откривање на наведениот протеин во урината е врз основа на termopretsipitatsii реакција. Претходно се користи методи со кои распуштање на протеини се проценува на температура од 100 ° C и reprecipitation со следните ладење, несигурни, бидејќи не сите протеини тела Bence Џонс поседува соодветни својства.

А повеќе сигурен откривање на парапротеин со тоа што наталожување на температура од 40 -60 ° C. Сепак, во овие услови претресот не може да се случи премногу кисела (pH < 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН > 6,5) моче, при низкой ОПМ и низкой концентрации белка Бенс-Джонса. Наиболее благоприятные условия для его осаждения обеспечивает методика, предложенная Patnem: 4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл 2 М ацетатного буфера рН 4,9 и согревают 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белка Бенс-Джонса в течение первых 2 мин появляется выраженный осадок.

Кога концентрацијата на протеинот Bence Jones помалку од 3 g / L примерок може да биде негативен, но во пракса тоа е исклучително редок, бидејќи неговата концентрација во урината, генерално, повеќе е значајна. На тестот со врела не може целосно да се потпреме. Со сигурност може да се открие во урина имуно-електрофореза метод со користење на специфични серуми против тешки и лесни имуноглобулин синџири.

NA Lopatkin

Сподели на социјални мрежи:

Слични