Техники

Тестирање прибор и средства за собирање на телесни течности (Nechiporenko, 1999)

Algotest да се измери на биолошката активност на хемиски соединенија (Barashkov, Kiristaeva 1977)

подготовка на примероци за мулти-елемент анализа на методолошките упатства на руската Федерална санитарна инспекција центар Мук 4.1.1483-03

метод Формулација на определување на олово во целата крв од страна на ICP-MS изотоп разредување (Пасхални et al., 1995)

Метод за multielement анализа на фракции на крв

Одредување сулфа соединенија (Prebsting и Гаврилова Timofeeva метод за одредување на промена на активноста на N-ацетилтрансфераза) (Pershyn 1971)

Тестирање прибор и средства за собирање на телесни течности (Nechiporenko, 1999)

контејнери за тестирање (цевки, ампули), шприцеви напишете "пеперутка" системи (пластични шприцеви и цевки).

1. Растворувач: мешавина од 1% HNO₃ и 0,001% Тритон X-100. Подготвени со дестилирана вода. 10 ml на HNO₃ (Реагенс одделение) е додаден во 500 ml на чиста вода во градуирана колба од 1 литар. Потоа се додава 1 ml на Тритон X-100. По распаѓањето, обемот на смесата се прилагоди на 1 литар.

2. За тестирање на пластичен шприц, контејнери, капиларите внатре е направен предметот и 1 ml на растворувач што е префрлен во цевката за анализа. Во случај решението се чува во внатрешноста на садот инвертираат за покритие или приклучокот сад за 12-14 ч. Во случај на тестирање метални игли се пренесуваат преку 1 ml раствор. Тогаш сите аналити индивидуално тестирани за содржината на метали.

3. Сите пресметки се врши на 1 ml раствор. Вкупната содржина на вкупниот метал во сите уреди не треба да надминува 5% од просечната еквивалент пресметаното ниво на метал содржина во биолошки примерок.

Algotest да се измери на биолошката активност на хемиски соединенија (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Во сертификатот на подолу опишан пронајдувачот № 557098. добиени во algotest 1977 g. Иако технички, овој метод не е многу комплицирано, тоа е потребно да се исполнат неколку услови, особено, да се обезбеди присуство на lyuminostata (Постојан флуоресцентни осветлување флуоресцентни лампи со интензитет од 3700 ERG / cm² sec, температура на инкубација 29 ± 3 ° C) и имаат искуство со алги.

Тест мезофилни организам е вид на зелените алги Хлорелата pyrenoidosa 82 од збирката на кафулиња. МСУ микробиологија. Тоа се одгледува 3 дена под постојана светлина, блескаво светилка со интензитет од 10 јануари⁵ ergs / cm² s на 28 ° C. целосно Tamiya средина уреа и додаде микроелементи во Арнон-4 раствор.

Пред клетки на експериментот алги (средината-log фаза на растење) е одвоена од медиум од страна на центрифугирање (3 tys.ob / min, 1200g, 5 мин), се мие со 0,01% натриум NaCl и разредена 5 пати Успение-1 медиум со pH вредност од околу 7,0, е целосно ослободен од органски додатоци.

На оптимална концентрација на алги клетки за максимална чувствителност (10-ти мај⁵ - 10-ти април⁶/ Ml) што одговара на 15-40 единици "индекс на силика-гел" (SP), која е еднаква на масата на суспензија во чадлива силика ГСЦ mg / ml со истиот оптичка густина на 578 nm како алги суспензија.

При оценување на токсичност на супстрати или нивни смеси се можни опции во врска со растворливоста на тест супстанции. растворлив во вода супстанција е воведена во кашеста маса во концентрации кои се разликуваат од страна на еден цел, на пример, 10, 1, 0.1, 0.01 mg / ml. Нерастворлива во вода супстанција во sverhrastvoritele администрира, на пример, диметилсулфоксид (DMSO) или диметилформамид (DMF). Sverhrastvoriteley концентрација не смее да надмине 3% се должи на својствени нивната токсичност.

Варен експериментални и контрола со идентична почетна кашеста маса SP₍₁ влегоа во 20-25 ml колби широк устата или Erlenmey-ЕПА (50-100 мл) или во стандарден тест цевки во рамки транспарентен, затворена со памук и се инкубира на 85-95 lyuminostate час. Технички удобен и задоволителни за статистичка обработка да се повторува секоја опција 5 пати.

По инкубацијата колби (или цевки) се става во бања на ултразвучно чистење и ултрасонично озрачени за 10-15 сек со 100 вати да се добие хомогена суспензија. Тие го дефинираат JV искуство и контрола (JV_K) Со апсорпцијата на 578 nm (или бројот на клетки). Пресметките врши од страна на формулата:

каде% T₂ - процент промена на културата удвојување време. А позитивен резултат укажува на присуство на овенат раст и токсичен ефект, односно негативен - стимулирачки ефект.

На критична концентрација (C_cr) Дали графички. оска на ординатата претставува пресметано вредности на% T₂ (Над 0 - позитивни, пониски - негативни), а на апсцисата - концентрацијата на супстанцијата за испитување на логаритамска скала. Место на пресекот на отсечка помеѓу точките со поголема и помала вредности% T₂ 5% ниво, паралелно на оската на апсцисата дава вредноста на K_cr- 5% се прифатени како критично ниво се должи на фактот дека некои супстанции кои не предизвикуваат јасна стимулативниот ефект, и да се намали под 5 зголемува релативната грешка во утврдувањето.

Многу лесен израз резултатот е, во прилог на К_cr, пресметка Пример токсичност во однос на токсичност на бакар сулфат за да се "Tox" (T_со), Утврдени во истата серија на експерименти: T_со = K^со_cr/ K_cr. Избор како стандардниот модел токсичност CuSO₄ се должи на фактот дека овој материјал ги исполнува следниве два услови: 1) е најшироко како модел на флуор и 2) обезбедува јасна вредност на K^со_cr на минимум разликата помеѓу токсични и стимулирање на концентрација.

PОТЕОд феномени селективна токсичност, следува дека на универзална тест организми не постојат. Познат тестови, како на тест со Daphnia, врз основа на утврдување на LD₅₀, што практично им овозможува да го поставите критична концентрација на супстанцијата за испитување, односно повисока организам кој од витално значење е инхибирана. Покрај тоа, тестот организмот за експерименти треба да биде во стандарден физиолошката состојба во секое време од годината. Ова барање е најдобро одговара за едноклеточни зелени алги.

Употребата на мезофилни видови на Хлорелата го прави возможно да се зголеми чувствителноста на bioassay во споредба со било кој друг за повеќе од два реда на големина, еден многу едноставен начин. Pre-вирус прерасна во целосна медиум со уреа, односно мезотрофична. Потоа клетките се мијат бесплатно на средни и се пресели во сиромашните autotrophic услови, кои се подложува на двојно физиолошки шок.

Потребата од воведување на внатрешен стандард токсичност произлегува од неможноста да се спроведе експерименти во различни сезони во исти услови. K^со_cr Таа варира од експериментот да експериментирате, но во повеќето случаи е околу 3 mg CuSO₄/ L.

подготовка на примероци за мулти-елемент анализа на методолошките упатства на руската Федерална санитарна инспекција центар Мук 4.1.1483-03

За подготовка на примероци со користење на ICP-MS да се користат јадења fluoroplastic измие во ултразвучна бања разредат во однос 1: 1 HNO₃ и да се исплакнат три пати со дејонизирана H₂О.

Селекција, чување и подготовка на примероци

коса исечени на задниот дел од главата во износ од >0.1 g, беше третирана со ацетон за 10-15 минути, се мие 3 пати со дејонизирана H₂О.

ноктите сече со двете раце, и да се третираат на ист начин. Двата објекти се чуваат во хартија коверти.

крв од улнарниот вена во износ >1 ml се чуваат во фрижидер за 3-5 дена или во замрзнувач (18 ° C) или лиофилизиран. За долгорочно чување на примероци се сместени во една употреба полипропиленски цевки со тесни капаци.

Исто така, се третираат на крвта во подготовка на лекови спакувани црвени крвни клетки, плазма и серуми, и мострата млеко, сперма, лимфата, плунка.

урина (Утро или дневно) во износ не помал од 5 ml беше ставен во затворен пластичен сад во фрижидер до 3 дена или замрзнати.

биопсии мускулите, кожата, епителните, црниот дроб, и други. веднаш по подготовката се мери, се става во затворени пластични садови и се чува во фрижидер за 3-5 дена или замрзнати.

Примероци од коските и забите беше ставен во запечатен пластична амбалажа од лабораторија.

препарати амино киселини, мултивитамини, хемијата и суровини за нивно производство доаѓа во производителот на пакувањето. На минимална тежина од 10 g цврсти препарати, течни - 100ml.

Отвори распаѓање на примероци

Коса, нокти и други. Солидна примероци. А делот од мострата се става во цилиндар тефлон е додаден 0,2-1,0 ml концентрирана HNO₃, заштитниот капак лабораториски филм и се става во термоблок на 0,5-1,0 часа на температура од 115 ° C до целосно растворување. Растворени примерок е квантитативно префрлен во мерење цевка и вода миење беше приспособена за да волумен од 10 ml, а потоа - на анализа.

Видео: Макс ОТ. техники за обука

течност примероци. Точно измерен примероци (0,1-0,5 mL) беше ставен во цилиндер тефлон, утврдување на тежината на примерок цевки маса разликата пред и по подготовка на примероци. Е додаден 0,3-1,0 ml концентрирана HNO₃ и хомогенизирана мостра како што е опишано погоре.

За да се спречи таложење на протеини и се компензира за примероците висок вискозитет дозволено едноставен разредување на мострата со дејонизирана вода проследено со закиселување со фактор на разредување на најмалку 1: 100.

микробранова распаѓање

Точно измерен примерок е ставен во крстосување тефлон, 5 ml HNO₃ и го стави во микробранова печка. Разградување се врши од страна на производителот на програмата (обично 5 минути на 200"C) квантитативно се пренесува во епрувета и обемот прилагоди до 10 ml со вода. Еден примерок од 1 ml беше приспособена за да волумен од 10 ml 0,5% HNO₃ и анализирани.

Дозволено директен избор на аликвотен број содржан во распаднат обемот на примерок од 0,1-0,5 ml. За да се компензира за грешки пред распаѓање разредување на мострата воведе внатрешен стандард (Во, Rh) За концентрацијата на аналитот во крајното решение беше околу 10 g / l. треба да се додаде на решение на внатрешен стандард на сите единечни и калибрација решенија.

Корекција изобар преклопуваат, полихидрични преклопување и бучавата од сообраќајот

Мешање дебагирање техники откриени од страна на одредување на стандард на прилог и мерни сериски разреден серија на примероци.

корекција изобарскиот Преклопување произведуваат автоматски, во согласност со софтверски пакети на инструменти за ICP-MS. Точна коефициенти корекција определува експериментално.

корекција полихидрични преклопување бара внимание на операторот да се елиминира мешање. Уреди со реакција ќелија се отстрани поголемиот дел од polyatomic преклопувања во принцип. Специфични методи за различни embodiments рачно да се отстрани мешање се познати и се прикажани во соодветните упатства на постоечки уред.

бучавата од сообраќајот од страна на исправување на максималната можна разредување и позадина нормализација киселина. Користењето на внатрешен стандард елиминира грешки примерок разредување и да се вклучат многу од ефектот на матрицата на плазма и проток на јони.

Калибрација на инструменти за мерење, анализа на мерењата и вршење на внатрешна оперативна контрола на опишана во соодветната инструкции за инструмент. производители на опрема да се спроведе соодветна обука за оператори во рамките на договорите за набавка на опрема.

метод Формулација на определување на олово во целата крв од страна на ICP-MS изотоп разредување (Пасхални et al., 1995)

Точно измерен примерок од целата крв на две 0,5 На додаден околу 100 mg од растворот (околу 100 microliters) на СРМ 983 стандард содржат 92,15 во.% ²⁰⁶Pb до финална концентрација од околу 1 mg Pb/ G. Во две aliquots се додаваат 2 ml концентрирана ултрачиста HNO₃ и изгори ги во микробранова печка во пондерирана тефлонски садови.

Остатоци ладење, префрлен во цевка од 15 ml и разредена до 10 ml со вода. Aliquots беа анализирани од страна на ICP-MS и утврди односот ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. концентрација Pb во оригиналниот примерок е пресметано со користење на формулата:

каде што [Pb] - концентрација Pb во непознат примерок во ng / g,

K - односот на релативната атомска маса на природен Pb на релативната атомска маса Pb во примерокот со додадена ²⁰⁶Pb (A_r = 206,063)

c_s - концентрација Pb во примерокот со додадена ²⁰⁶Pb во ng / g,

m_sp - тежина (g) е внесен во раствор на ²⁰⁶Pb,

m_sm - тежина (g) на оригиналниот примерок,

0,0125 - релативната содржина ²⁰⁸Pb во примерокот со додавање на СРМ 983

0.921497 - релативна содржина ²⁰⁶Pb во истиот раствор,

208/206 (S) - односот во додаде раствор,

А₂₀₆ и а₂₀₈ - природна содржина ²⁰⁶Pb и ²⁰⁸Pb во оригиналниот примерок.

Метод за multielement анализа на фракции на крв

за плазма обично во стандардна структура пластична цевка кои припаѓаат на антикоагулант (хепарин-Na или -Ли сол, K₂-EDTA Trilon B = 9NC Na цитрат, оксалат) Земи примерок од крвта. Клетките треба да бидат одделени што е можно поскоро со центрифугирање, како краткотрајно дејство на хепарин и антикоагулантна значително менување на елементарниот состав на серум. За долгорочно чување на примероци од крв во фрижидер е неизбежен процес на хемолиза се случи, а во делот за замрзнување на крвните клетки се уништени.

за серуми овозможи на примерокот на крв коагулира ( "Навивам"), по што згрутчување на фибрин е одвоена заедно со клетки. Ако сакате да се добие филтратот протеин-слободен (BBF), а потоа до 1 дел крв додаде 9 делови 5% TCA (TCA). талог протеин е отстранет од страна на центрифугирање (2-та. вртежи / мин, 10 мин). За определување на елементите на супернатантот се користи.

0.5 ml на крв или плазма или серум е ставен во микробранова шишенце е додаден 4,5 ml од 30% HNO₃. содржината минерализирана (На пример, во една фирма микробранова печка Бергхоф Speedwave ™ СМЖ-2 програмата P₆ процес на 3-чекор (25 мин)).

Минерализирана решение е разредена со 5% HNO₃ до 10 ml (разредување 20 пати) и се користат за одредување на ICP-MS.

забелешкаВо случај на исклучување обем резултати за одделни елементи на анализа разредена. Сите раствори во предвид во последните минути од резултатите.

Одредување сулфа соединенија (Prebsting и Гаврилова Timofeeva метод на промена за утврдување на активност N-ацетилтрансфераза) (Pershin, 1971)

реагенси:

1) 15% трихлороцетна киселина (TCA)

2) 0.5% раствор на Нано₂

3) заситен раствор на CH₃COONa (1 дел од сол се растворени во 2,8 делови на H₂O)

4) 0.5% раствор на ацетилирани H-киселина (1,8-aminooksinaftalin-3,6-дисулфонска киселина) (подготвени на денот на експериментот)

5) 7-10% раствор HCl

6) Главната стандарден раствор

10 mg sulfadimezin norsulfazola или се става во волуметриска колба од 100 ml и 2,1 ml од 0,1 N NaOH целосно да го распушти sulfanilamide. надополни со дестилирана H₂O до ознаката, односно пред концентрација на лекот 100 ug во 1 ml од раствор. Решението е се чуваат во фрижидер.

Калибрациона крива е изграден со помош на серија на решенија да учат лекови земени за анализа photoelectrocolorimeter (FEC) со син филтер, на пример, 10-8-6-4-2 ug / ml.

Предмет се дава 1-2 таблети на сулфа лекови, и собрани секојдневно урина. Цевката е исполнет со 0,2 ml на урина е додаден 2 ml раствор №1 + 1 № 5 ml и 6,8 ml дестилирана H₂O. По мешање и филтрирање на 1 ml од филтратот одговара на 0,02 ml на урина.

Анализа на слободни sulfanilamide. Во цевка тестот се истури 2,5 мл урина филтратот истури 0,1 ml раствор № 2, беше измешана и по 10 мин истури 1,5 ml раствор № 3 и повторно се меша. Веднаш, 0,25 мл раствор № 4. По темелно мешање појавува розова боја. Во 15 минута, интензитетот се мери врз FEC со син филтер.

Стандарди за работа третираат Тејт истото. Од кривата на калибрација на концентрацијата на слободен лек е пресметано земајќи ги предвид сите раствори.

Анализа на вкупните sulfanilamide. По приемот на дрога во телото на субјектот acetylated N-ацетилтрансфераза. Овој дел може да се утврди само по хидролиза. Во цевка тестот се истури 2,5 ml мостра и 0,25 ml № 5. Исто така, исто така, работи со стандардни раствори. Цевка со смесата се става во врела вода бања за 30 мин. Откако ќе се излади, обемот на течност во цевката беше спонзор прилагоди на 2,5 ml дестилирана H₂O. Уште да се работи со решение во согласност со методот на одредување на бесплатно sulfanilamide.

Калибрациона крива изградени со стандарден работен раствор по хидролиза се пресметува вкупниот износ на дрога (слободни и Acetylated) во примерокот. По одземање на износот на слободен лек добиен во износ од Acetylated подготовка %% во однос на вкупниот број.

Медицински bioneorganika. GK овци